琼脂糖凝胶电泳怎样检测DNA？聚丙烯酰胺凝胶电泳和琼脂糖凝胶电泳的异同？

琼脂糖凝胶电泳怎样检测DNA？

如果DNA出现降解或者是混有其他杂质，例如蛋白质、RNA的话，那么琼脂糖凝胶就能够检测得到DNA的质量。 标准主要是通过观察电泳条带的亮度，通过亮度就可以粗略地计算出DNA条带的含量。如果DNA出现损失，对应的条带就会变暗或者是消失。 线性的单一DNA样品一般是单条带,质粒的话可能会有2-3条带. 如果条带变宽、变暗、或者变成弥散的DNA条带,表示DNA非特异的降解. 如果条带变成多条,表示可能被酶切.如果质粒被单酶切,可能变成一条亮带. 如果有蛋白质污染,上样孔可能发亮.如果有RNA污染,可能小分子量部分会有弥散.

聚丙烯酰胺凝胶电泳和琼脂糖凝胶电泳的异同？

琼脂糖和聚丙烯酰胺可以制成各种形状、大小和孔隙度。琼脂糖凝胶电泳分离 DNA 片断大小范围较广,不同浓度琼脂糖凝胶可分离长度从 200bp 至近 50kb 的 DNA 片段。琼脂糖通常用水平装置在强度和方向恒定的电场下电泳。

聚丙烯酰胺分离小片段 DNA (5-500bp)效果较好,其分辨力极高,甚至相差 1bp 的 DNA 片段就能分开。聚丙烯酰胺凝胶电泳很快,可容纳相对大量的 DNA ,但制备和操作比琼脂糖凝胶困难。聚丙烯酰胺凝胶采用垂直装置进行电泳。目前,一般实验室多用琼脂糖水平平板凝胶电泳装置进行 DNA 电泳。

DNA电泳一般使用的都是琼脂糖凝胶电泳，电泳的驱动力靠DNA骨架本身的负电荷。 聚丙烯酰氨（PAGE）凝胶电泳用于蛋白质与寡糖核苷酸的分离。电泳的驱动力靠与蛋白质结合的SDS上所携带的负电荷。蛋白质电泳（一般指SDS-PAGE）根据蛋白分子量亚基的不同而分离蛋白。蛋白质亚基的电泳迁移率主要取决于亚基分子量的大小，电荷因素可以忽视。 所以相同点就是样品都是带负电荷的，从负极向正极移动，移动的距离都和样品的分子量有关。

而且这两个电泳体系可以互相交换使用。

为什么电泳使用琼脂糖而不用琼脂？

电泳使用琼脂糖而不用琼脂，是因为琼脂糖具有更好的溶解性和透明度，可以减少背景干扰，同时还可以提供更好的凝胶强度和稳定性，使得电泳结果更加准确和可靠。
此外，琼脂糖还可以通过改变其浓度来调节凝胶孔径，从而适应不同的DNA片段大小。
因此，琼脂糖是电泳中常用的凝胶成分之一。
除了琼脂糖，电泳中还常用其他凝胶成分，如聚丙烯酰胺凝胶和琼脂糖-聚丙烯酰胺混合凝胶等。
不同的凝胶成分具有不同的特点和适用范围，研究者需要根据实验需要选择合适的凝胶成分。
同时，电泳实验中还需要注意凝胶制备、电泳条件等多个因素的影响，以确保实验结果的准确性和可重复性。

电泳使用琼脂糖而不用琼脂的原因是琼脂糖的分子量较小，更易于扩散和渗透，能够更好地包裹DNA或RNA分子，使其在电场中移动更加均匀和稳定。
此外，琼脂糖的凝胶强度也比琼脂更好，可以更好地保持凝胶的形状和稳定性，从而更适合于电泳实验。
琼脂糖是一种高分子物质，由于其分子量较小，所以在电泳实验中更易于扩散和渗透，能够更好地包裹DNA或RNA分子，使其在电场中移动更加均匀和稳定。
此外，琼脂糖的凝胶强度也比琼脂更好，可以更好地保持凝胶的形状和稳定性，从而更适合于电泳实验。
因此，在分子生物学领域中，琼脂糖已经成为一种常用的电泳凝胶材料。

琼脂糖凝胶电泳其分析原理与其它支持物电泳的最主要区别是：它兼有“分子筛”和“电泳”的双重作用。琼脂糖凝胶具有网络结构，直接参与带电颗粒的分离过程，在电泳中，物质分子通过空隙时会受到阻力，大分子物质在泳动时受到的阻力比小分子大，因此在凝胶电泳中，带电颗粒的分离不仅依赖于净电荷的性质和数量，而且还取决于分子大小，这就大大地提高了分辨能力。

琼脂糖系天然的琼脂加工制得，天然琼脂是一种多聚糖，主要由琼脂糖（约占80%）及琼脂胶组成。琼脂糖是由半乳糖及其衍生物构成的中性物质，不带电荷。而琼脂胶是一种含硫酸根和羧基的强酸性多糖，由于这些基团带有电荷，在电场作用下能产生较强的电渗现象。所以常用于血清蛋白、血红蛋白、脂蛋白、糖蛋白、乳酸脱氢酶、碱性磷酸酶等同工酶的分离和鉴定，为临床某些疾病的鉴别诊断提供了可靠的依据。与免疫化学反应相结合发展成为免疫电泳技术，用于分离和检测抗原。可对目前常用的琼脂糖进行某些修饰，如引入化学基团羟乙基，则可使琼脂糖在65℃左右便能熔化，被称为低熔点琼脂糖。该温度低于DNA的熔点，而且凝胶强度又无明显改变。以此为支持物进行电泳，称为低熔点琼脂糖凝胶电泳，主要应用于DNA研究。如DNA鉴定，DNA限制性内切酶图谱制作等，为DNA分子及其片段分子量测定和DNA分子构象的分析提供了重要手段。

因为琼脂糖的酸解特性和明胶一样，可以通过调整pH值来实现电泳结果和分离效果的调整，而琼脂则缺乏这种特性。
此外，琼脂糖在水溶液中的稳定性更强，分离效果更为清晰，因此常用于DNA或蛋白质等生物分子的电泳分离。

电泳使用琼脂糖而不用琼脂的原因是琼脂糖可以帮助样品形成较为均一的带状。
琼脂糖与琼脂的区别在于，琼脂糖可以形成一个微细的网状分子结构，能够更好地确定样品分子的大小，并让它们在电泳过程中形成较为均一的带状。
相比之下，只使用琼脂的话，它的颗粒较大，样品分子容易被挡住或聚集成块，形成的带状比较不清晰。
除了琼脂糖，还有其他各种凝胶可以用于电泳。
凝胶的选择需要根据样品的大小、电荷、以及操作人员的经验等因素来进行选择。